Широкое внедрение методики ICSI в клиническую эмбриологию в начале
И вот здесь возникает довольно серьезная проблема, которая состоит в том, что в ходе манипуляций уникальные единичные сперматозоиды могут быть утрачены даже в очень небольших, микроскопических объемах. Решить эту проблему могут микроконтейнеры. Они физически локализуют объект в большем объеме, и тем самым значительно упрощают и облегчают манипуляции, связанные с обработкой криоконсервантами, размораживанием и поиском сперматозоидов при оплодотворении путем ICSI. Для пациента такая криоконсервация может быть страховкой от неполучения сперматозоидов непосредственно в день пункции или избавлением от повторной травматичной операции. Иными словами, микроконтейнеры облегчают жизнь и эмбриологу, и пациенту.
В 1996 г. американский исследователь Жак Коен из Института репродуктивной медицины и науки Медицинского центра св.Варнавы в Ливингстоне (IRMS), предложил методику криоконсервации единичных сперматозоидов в пустых оболочках ооцитов человека и лабораторных животных (рис.1). Эти неклеточные оболочки из гелеподобного вещества носят название zona pellucida (ед.число). Они окружают каждую яйцеклетку, и ранние зародыши развиваются в этих оболочках до вылупления из них на стадии бластоцисты, непосредственно перед имплантацией. Zonae pellucidae (мн.число) являются очень хорошими микроконтейнерами, потому что помещать в них сперматозоиды можно точно так же, как в цитоплазму яйцеклетки при ICSI, а криоконсервация в таких контейнерах похожа на криоконсервацию эмбрионов. И все же, несмотря на успешное использование этой методики в клинике IRMS, она по-прежнему остается экспериментальной и не используется широко. Этому препятствуют многие обстоятельства, два из которых наиболее существенны. Во-первых, подготовка такого микроконтейнера довольно сложна, необходимо извлечь из оболочки клеточное содержимое, и каждый контейнер подготавливается индивидуально. Во-вторых, такие микроконтейнеры животного происхождения могут быть инфицированы вирусами и не исключают контакта сперматозоидов с биологически активными веществами и чужеродным генетическим материалом.
Чтобы избежать этих проблем, мы разработали и изготовили искусственные микроконтейнеры, напоминающие zonae pellucidae (рис.2). Для их изготовления мы используем только два вещества — деионизованную стерильную воду и агарозу. Агароза сходна по своей природе и свойствам с веществами оболочек яйцеклеток, но она биологически инертна и безопасна для сперматозоидов. Изготовление микроконтейнеров происходит в стерильных условиях и исключает возможность заражения. Сам процесс замораживания сперматозоидов в микроконтейнерах не отличается принципиально от обычной криоконсервации в жидком азоте, а выживаемость сперматозоидов ничуть не ниже. Эта новая методика позволяет нам проводить криоконсервацию в тех случаях, когда приходится иметь дело лишь с единичными сперматозоидами во всем объеме спермы. Мы надеемся, что в будущем сможем эффективно использовать этот способ хранения уникального генетического материала в нашей работе.
Исаев Д.А., Залетов С.Ю.
